บทที่ 3 วิธีดำเนินการ

วัสดุอุปกรณ์                                                                     

1.1          บีกเกอร์

1.2          โกร่ง

1.3          เครื่องชั่งสาร

1.4          เขียง

1.5          มีด

1.6          แท่งแก้วคนสาร

1.7          กระดาษกรอง

1.8          กรวย

1.9          ขวดวัดปริมาตร

1.10            กระบอกตวง

1.11            เครื่องปั่นสาร

1.12            ขวดรูปชมพู่

1.13            จานเพาะเชื้อ

1.14            หลอดแยกสาร

1.15            ปากคีบ

1.16            ตะเกียงแอลกอฮอล์

1.17       ลูป

1.18        ดิท

1.19       ปิเปตต์

สารเคมี

1.1         น้ำกลั่น

1.2         Beef extract

1.3         Peptone

1.4         Agar

1.5         แอลกอฮอล์

1.6        สมุนไพร

1.7        Carbopol

1.8        Triethanolamine

1.9        น้ำหอม

ขั้นตอนการดำเนินงาน

1. กำหนดปัญหา หาสาเหตุ และกำหนดกลุ่มเป้าหมาย
       - ศึกษาข้อมูลเกี่ยวกับเชื้อแบคทีเรีย Escherichia coli
       - ศึกษาข้อมูลเกี่ยวกับสารสมุนไพรที่สามารถยับยั้งเชื้อแบคทีเรีย Escherichia coli
       - ศึกษาข้อมูลเกี่ยวกับวิธีการสกัดสารที่ดีที่สุดในการสกัดสารสมุนไพรที่สามารถยับยั้งการเจริญของแบคทีเรียEscherichia coli

2. ดำเนินการทดลอง

         - วางแผนการดำเนินงาน
         - ติดต่อขอใช้ห้องปฏิบัติการในการทำงานวิจัย และ ขอแบคทีเรีย Escherichia coli ที่บริสุทธิ์     
           จาก ภาควิชาจุลชีววิทยา คณะวิทยาศาสตร์ มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ วิทยาเขตบางเขน
         - ขั้นตอนการทดสองแบ่งออกเป็น 4 ส่วนคือ
                ส่วนที่ 1 : การเพาะเลี้ยงเชื้อแบคทีเรีย

                นำ Beef extract 3 กรัม Peptone 5 กรัม Agar 15 กรัม ผสมน้ำกลั่น 1ลิตร นำไปนิ่งฆ่าเชื้อที่ความดันไอ 121⁰C   นาน 15 นาที ทิ้งให้เย็นประมาน50 ⁰C เทอาหารลงบนเพลตที่เตรียมไว้ นำเชื้อบริสุทธิ์มา ขีดลงบนเพลตที่มีอาหารอยู่ ทิ้งไว้ 18 ช.ม. นำเชื้อที่เจริญบนเพลต มาใส่ในอาหารเหลว(นำ Beef extract 3 กรัม Peptone 5 กรัม ผสมน้ำกลั่น 1ลิตร นำไปนิ่งฆ่าเชื้อที่ความดันไอ 121⁰C   นาน 15 นาที ทิ้งให้เย็นประมาน
50 ⁰C) ทิ้งไว้ 18 ช.ม. นำเชื้อที่ได้จากอาหารเหลวมาสตรีก เพื่อรอทดสอบต่อไป

                ส่วนที่ 2 : การสกัดสาร

-นำสมุนไพร 20 กรัมมาบดให้เป็นชิ้นเล็กๆ จากนั้นนำไปสกัดหยาบด้วยเอทิลแอลกอฮอล์ 95% 30cm³ ผ่านกระดาษกรอง หลังจากนั้นจัดเก็บสาร

   -นำสมุนไพร 20 กรัมมาบดให้เป็นชิ้นเล็กๆ จากนั้นนำไปสกัดด้วย น้ำร้อน 30cm³

ผ่านกระดาษกรอง หลังจากนั้นจัดเก็บสาร

ส่วนที่ 3 : การดูผลการทดสอบ

                นำเชื้อในอาหารเหลวมาสตรีกลงบนเพลตอาหาร จากนั้นหยดสารสกัดสมุนไพร 40 มิลลิตรลงบนดิท และนำมาวางไว้ในเพลตที่มีเชื้อที่สตรีกไว้ หลังจากนั้นดูพื้นที่เคลียร์โซน และบันทึกผลการทดลอง

ส่วนที่ 4 : ทำเจลล้างมือ

                เตรียมบีกเกอร์2000 ซีซีเทน้ำบริสุทธิ์ 500ซีซี ผสมเอทิลแอลกอฮอล์ 95% เพื่อฆ่าเชื้อประมาณ 375 ซีซี แล้วค่อยๆ โปรยคาร์โบพอล 940 ราว 1.2 กรัม กวนให้กระจายตัวราว 30 นาที หรือใช้เครื่องกวนก็ได้ เพื่อให้เกิดเจล

ขั้นตอนต่อมาใส่สารสกัด 3 กรัม ก่อนใส่ไตรเอทาโนลามีน ปรับความข้นของเจล อีก 5 กรัม ใส่กลิ่นหัวเชื้อน้ำหอมหรือกลิ่นสมุนไพร 5 ซีซี คนให้เข้ากันก็จะได้เจลแอลกอฮอล์มาบรรจุขวด

3. วิเคราะห์ข้อมูลที่ได้จากการทดลอง
    - โดยสารสกัดใดมีรัศมีของ Clear Zone มากที่สุด แสดงว่าสารสกัดนั้นสามารถยับยั้งการเจริญของ 
       แบคทีเรีย Escherichia coli ได้ และเปรียบเทียบสารที่สกัดจากแอลกอฮอล์และน้ำร้อน

4. สรุปและประมวลผล